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應(yīng)用案例
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天木生物MMC成功助力高乙醇耐受性釀酒酵母的選育

來源:   作者: 發(fā)布日期:2023-09-28 訪問量:3334


     本期為您推薦河南科技學(xué)院楊天佑教授團(tuán)隊(duì)發(fā)表在Journal of The Science of Food and Agriculture上的一篇文章:Breeding of high-tolerance yeast by adaptive evolution and high-gravity brewing of mutant。 本研究采用優(yōu)化的微生物微滴培養(yǎng)平臺(tái)(MMC),對(duì)釀酒酵母進(jìn)行適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化(ALE),篩選得到乙醇耐受性升高的菌株。對(duì)獲得的優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行超高濃度釀造工藝研究,表明其在超高濃度啤酒釀造中具有應(yīng)用價(jià)值。

     啤酒是世界上消費(fèi)最廣泛的酒精飲料,近年來,越來越多的人喜歡飲用具有多種風(fēng)格和口味的精釀啤酒。烈性啤酒因?yàn)槠渚苹ê扛?、風(fēng)味濃郁、酒精含量高受到如中國(guó),意大利和澳大利亞啤酒喜好者的追捧。烈性啤酒被定義為原始麥芽汁超過16°P(柏拉圖度)和酒精含量超過6.5%(v/v)的啤酒。但是超高濃度的釀造會(huì)使得釀酒酵母發(fā)酵緩慢和活力低下,其中乙醇脅迫源是影響釀造的最主要因素,因此選育高乙醇耐受性菌株成為超高濃度釀造的主要途徑。

     目前提高釀酒酵母酒精耐受性的主要方法包括適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化(ALE)、誘變、原生質(zhì)體融合,以及基因操作如基因組編輯、代謝工程和靶向基因表達(dá)調(diào)控等技術(shù)。ALE是利用生物體適應(yīng)所選擇的環(huán)境條件的能力來改良菌株,而傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法操作繁瑣、產(chǎn)量低、效率低、耗費(fèi)大量的人力和試劑,導(dǎo)致ALE耗時(shí)耗力。而近期基于液滴微流控技術(shù)的新型微生物培養(yǎng)和篩選系統(tǒng),即自動(dòng)高通量微生物微滴培養(yǎng)系統(tǒng)(MMC),可以有效的解決上述傳統(tǒng)培養(yǎng)所出現(xiàn)的問題,為高效率的篩選乙醇耐受性酵母提供技術(shù)基礎(chǔ)。

     研究團(tuán)隊(duì)首先利用前期篩選得到的菌株YN81,在不同濃度的乙醇條件下進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)12%的乙醇存在時(shí),酵母生長(zhǎng)停滯,因此選取6%-12%作為適應(yīng)性進(jìn)化濃度范圍。在MMC中生成50個(gè)液滴體系,在50天的馴化時(shí)間內(nèi)分別6%,6.6%,7.2%, 7.8%, 8.4%,9.0%,9.6% 和12%梯度添加乙醇,傳代時(shí)間設(shè)定為11 h。最后在12%濃度的乙醇條件下,有3株菌可以良好的生長(zhǎng),分別為1,3,45號(hào)液滴(圖1)。在300、340、380和420 g/L蔗糖的YPD培養(yǎng)基下,篩選菌株的生長(zhǎng)速度均高于親本菌株YN81,其中YN81mc-8.3在420 g/L蔗糖濃度下的細(xì)胞濃度明顯高于其他菌株,顯示出較好的糖耐受性(圖2)。同時(shí)在不同濃度的乙醇脅迫下YN81mc-8.3也顯示出最好的乙醇耐受性(圖3)。

     對(duì)獲得的優(yōu)良菌株在遺傳穩(wěn)定性,超高濃度釀造以及啤酒的口感風(fēng)味方面進(jìn)行分析(圖4-7)。結(jié)果顯示篩選出的菌株具有良好的遺傳穩(wěn)定性,在釀造過程中的麥汁速率以及最終的乙醇含量均高于野生型。對(duì)釀造出的啤酒進(jìn)行感官分析表明YN81mc-8.3生產(chǎn)的烈性啤酒在視覺、嗅覺和味覺特征方面有著更好的表現(xiàn)。這些結(jié)果顯示MMC在高濃度乙醇耐受性的釀酒酵母選育方面具有應(yīng)用前景。


      圖片1


圖1 釀酒酵母YN81在MMC中八個(gè)不同階段的適應(yīng)性進(jìn)化結(jié)果

圖片2


圖2 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81在不同蔗糖濃度的YPD培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線

圖片3


圖3 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81在不同乙醇濃度的YPD培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線

圖片4


圖4 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81的遺傳穩(wěn)定性


圖片5


圖5 烈性啤酒釀造過程中的原麥汁和乙醇濃度變化

圖片6

圖6 不同啤酒樣品的物理化學(xué)參數(shù)

圖片7



圖7 不同啤酒樣品的感官分析



論文鏈接:https://doi.org/10.1002/jsfa.12959






     本期為您推薦河南科技學(xué)院楊天佑教授團(tuán)隊(duì)發(fā)表在Journal of The Science of Food and Agriculture上的一篇文章:Breeding of high-tolerance yeast by adaptive evolution and high-gravity brewing of mutant。 本研究采用優(yōu)化的微生物微滴培養(yǎng)平臺(tái)(MMC),對(duì)釀酒酵母進(jìn)行適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化(ALE),篩選得到乙醇耐受性升高的菌株。對(duì)獲得的優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行超高濃度釀造工藝研究,表明其在超高濃度啤酒釀造中具有應(yīng)用價(jià)值。

     啤酒是世界上消費(fèi)最廣泛的酒精飲料,近年來,越來越多的人喜歡飲用具有多種風(fēng)格和口味的精釀啤酒。烈性啤酒因?yàn)槠渚苹ê扛摺L(fēng)味濃郁、酒精含量高受到如中國(guó),意大利和澳大利亞啤酒喜好者的追捧。烈性啤酒被定義為原始麥芽汁超過16°P(柏拉圖度)和酒精含量超過6.5%(v/v)的啤酒。但是超高濃度的釀造會(huì)使得釀酒酵母發(fā)酵緩慢和活力低下,其中乙醇脅迫源是影響釀造的最主要因素,因此選育高乙醇耐受性菌株成為超高濃度釀造的主要途徑。

     目前提高釀酒酵母酒精耐受性的主要方法包括適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)室進(jìn)化(ALE)、誘變、原生質(zhì)體融合,以及基因操作如基因組編輯、代謝工程和靶向基因表達(dá)調(diào)控等技術(shù)。ALE是利用生物體適應(yīng)所選擇的環(huán)境條件的能力來改良菌株,而傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法操作繁瑣、產(chǎn)量低、效率低、耗費(fèi)大量的人力和試劑,導(dǎo)致ALE耗時(shí)耗力。而近期基于液滴微流控技術(shù)的新型微生物培養(yǎng)和篩選系統(tǒng),即自動(dòng)高通量微生物微滴培養(yǎng)系統(tǒng)(MMC),可以有效的解決上述傳統(tǒng)培養(yǎng)所出現(xiàn)的問題,為高效率的篩選乙醇耐受性酵母提供技術(shù)基礎(chǔ)。

     研究團(tuán)隊(duì)首先利用前期篩選得到的菌株YN81,在不同濃度的乙醇條件下進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)12%的乙醇存在時(shí),酵母生長(zhǎng)停滯,因此選取6%-12%作為適應(yīng)性進(jìn)化濃度范圍。在MMC中生成50個(gè)液滴體系,在50天的馴化時(shí)間內(nèi)分別6%,6.6%,7.2%, 7.8%, 8.4%,9.0%,9.6% 和12%梯度添加乙醇,傳代時(shí)間設(shè)定為11 h。最后在12%濃度的乙醇條件下,有3株菌可以良好的生長(zhǎng),分別為1,3,45號(hào)液滴(圖1)。在300、340、380和420 g/L蔗糖的YPD培養(yǎng)基下,篩選菌株的生長(zhǎng)速度均高于親本菌株YN81,其中YN81mc-8.3在420 g/L蔗糖濃度下的細(xì)胞濃度明顯高于其他菌株,顯示出較好的糖耐受性(圖2)。同時(shí)在不同濃度的乙醇脅迫下YN81mc-8.3也顯示出最好的乙醇耐受性(圖3)。

     對(duì)獲得的優(yōu)良菌株在遺傳穩(wěn)定性,超高濃度釀造以及啤酒的口感風(fēng)味方面進(jìn)行分析(圖4-7)。結(jié)果顯示篩選出的菌株具有良好的遺傳穩(wěn)定性,在釀造過程中的麥汁速率以及最終的乙醇含量均高于野生型。對(duì)釀造出的啤酒進(jìn)行感官分析表明YN81mc-8.3生產(chǎn)的烈性啤酒在視覺、嗅覺和味覺特征方面有著更好的表現(xiàn)。這些結(jié)果顯示MMC在高濃度乙醇耐受性的釀酒酵母選育方面具有應(yīng)用前景。


      圖片1


圖1 釀酒酵母YN81在MMC中八個(gè)不同階段的適應(yīng)性進(jìn)化結(jié)果

圖片2


圖2 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81在不同蔗糖濃度的YPD培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線

圖片3


圖3 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81在不同乙醇濃度的YPD培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線

圖片4


圖4 脅迫選擇后的3個(gè)菌株與野生型YN81的遺傳穩(wěn)定性


圖片5


圖5 烈性啤酒釀造過程中的原麥汁和乙醇濃度變化

圖片6

圖6 不同啤酒樣品的物理化學(xué)參數(shù)

圖片7



圖7 不同啤酒樣品的感官分析



論文鏈接:https://doi.org/10.1002/jsfa.12959





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